Implication des protéines ATF7, CREB et des TAFs associés dans la genèse des mélanomes

Fiche projet

Année

2010

Appel à projets

PLBIO 2010 - Projets libres en Recherches biomédicales (INCa)

Resumé

Contexte.

Le mélanome, compte tenu de son mauvais pronostic, constitue un problème important de santé publique en France où on enregistre un taux d’incidence en constante augmentation. La transformation des mélanocytes en mélanome implique souvent des mutations des protéines BRAF et/ou KIT conduisant à l'activation constitutive de la voie des MAP kinases, alors que la formation des métastases est contrôlée par l’interférence entre le facteur de transcription MITF et la voie TGFß. La régulation de l'expression de MITF est donc une étape critique dans la formation de métastases. ATF7 est un facteur de transcription qui se lie sous forme d’homodimère aux éléments CRE des promoteurs ou comme un hétérodimère associé à Jun sur des sites TRE. Son activité est contrôlée par la voie de signalisation MAP-kinase et des interactions avec les sous-unités TAF4 et TAF12 du complexe TFIID. Les promoteurs des gènes codant TGFß2 et MITF contiennent des éléments CRE et sont activés par CREB en réponse à divers signaux physiologiques. Dans ce projet, nous cherchons étudier le rôle du facteur de transcription ATF7 dans la régulation de ces deux gènes qui sont critiques pour la formation de métastases issues de mélanome.

Projet.

Nous utiliserons des techniques de surexpression, d’interférence à l’ARN et de précipitation de Chromatine (ChIP) pour examiner les rôles d’ATF7 et de ses cofacteurs (TAFs) dans la régulation de l’expression des gènes MITF et TGFß. Nous déterminerons si ATF7 agit comme agoniste ou antagoniste de CREB lors de l'activation de ces promoteurs dans les mélanocytes et des cellules de mélanome avec différentes capacités tumorigéniques. Nous utiliserons les techniques de siRNA-knockdown couplées au séquençage de l'ARN, de « ChIP-sequençing » afin d'identifier l'ensemble des gènes cibles d’ATF7, de CREB et de leurs cofacteurs (TAFs) dans des cellules de mélanome. Puis le rôle des nouveaux gènes cibles d’ATF7 dans les mélanomes seront analysés par interférence à l’ARN. Nous avons récemment identifié un nouveau variant d'épissage d’ATF7, ATF7-4, qui est principalement exprimé dans le placenta, les fibroblastes sénescents et de nombreuses tumeurs. ATF7-4 est cytoplasmique et inhibe fortement l'activité des facteurs ATF7 et ATF2. Nous établirons le rôle de l'isoforme ATF7-4 et son mode d'action dans les mélanomes par rapport aux mélanocytes. En utilisant la plateforme de criblage à haut débit de cellules transfectées (utilisation d’une banque de siRNA dirigée contre le kinome humain), nous identifierons les protéine-kinases cellulaires responsables de la phosphorylation d’ATF7-4 et de son activation. Les effets de l’inhibition de ces protéine-kinases sur la phosphorylation d’ATF7 et la régulation des gènes dans les cellules de mélanome seront déterminés.